实验案例
实验准备:
1. 将金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、白假丝酵母、单纯疱疹病毒Ⅱ型和阴性血混合,再添加适量的PBS使得单纯疱疹病毒Ⅱ型的终浓度为10^3cp/mL,其他病原微生物的终浓度为10^5cp/mL,并将此样本命名MA,提取得到的核酸命名为DMA。
2. 将zymo的菌液和阴性血混合,再添加适量的PBS使得各病原微生物的终浓度为10^5cp/mL,并将此样本命名为MB,提取得到的核酸命名为DMB。其中zymo菌液包含铜绿假单胞菌、大肠杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌和新生隐球菌。
实验案例1
1.1实验方法
参照 TQ007D-64、试剂盒A 、试剂盒B和试剂盒C同类产品的实验流程对样本MA和样本MB进行微生物核酸提取,随后进行tNGS一轮扩增、二轮扩增,经质控合格后使用Oxford Nanopore Sequencing平台进行测序;下机数据分析得到不同微生物的检出 Reads 数。
1.2实验结果
图1. MA样本中包含的微生物分别检出的Reads数
图2. MB样本中包含的微生物分别检出的Reads数
1.3实验结论
在阴性血液背景下,TQ007D-64对不同种类标准病原微生物以及zymo菌液包含的微生物的检出 Reads数总体都优于试剂盒A 、试剂盒B和试剂盒C同类产品。
实验案例2
2.1 实验样本
金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、白假丝酵母、单纯疱疹病毒Ⅱ型。
2.2 实验方法
将病原微生物用PBS分别稀释到终浓度为10^5cp/mL;参照 TQ007D-64、试剂盒D和试剂盒E同类产品的实验流程对上述样本及样本MA和MB进行微生物核酸提取;随后使用qPCR 法对提取得到的微生物核酸进行定量。
2.3 实验结果
图3. 不同单一病原微生物样本qPCR 定量结果
(D -TD:试剂盒D提取的核酸qPCR的CT值减TQ007D-64提取的核酸qPCR的CT值;
E -TD:试剂盒E提取的核酸qPCR的CT值减TQ007D-64提取的核酸qPCR的CT值。)
图4. 混合样本中病原微生物qPCR 定量结果
(D -TD:试剂盒D提取的核酸qPCR的CT值减TQ007D-64提取的核酸qPCR的CT值;
E -TD:试剂盒E提取的核酸qPCR的CT值减TQ007D-64提取的核酸qPCR的CT值。)
2.4实验结论
TQ007D-64对各病原微生物的检出情况优于试剂盒D 和试剂盒E同类产品。